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Estudios de Eficacia Farmacológica

Ofertamos un amplio portafolio de protocolos para evaluar las respuestas inmunes naturales y específicas tanto en células primarias (humanas y murinas), como en líneas celulares. Con esto ponemos al alcance de nuestros clientes y colaboradores todas las herramientas necesarias para el desarrollo de un estudio de eficacia preclínica completo, así como los estudios de toxicidad no-GLP necesarios para la validación de un candidato.

De esta forma, los modelos in vivo e in vitro propuestos, son idóneos para la validación preclínica de compuestos en un amplio espectro de aplicaciones. Finalmente, destacar que la disponibilidad de 23 líneas de ratones knock out nos permite también profundizar en el mecanismo de acción de dichos fármacos.

Tipos Celulares disponibles:

  • Células linfoides primarias humanas y murinas (linfocitos T, B, monocitos, granulocitos y células NK).
  • Células dendríticas.
  • Células endoteliales primarias.
  • Miocitos de arteria pulmonar.
  • Líneas transformadas: linfoides, endoteliales y sinoviales.
  • Cáncer: disponemos de un amplio panel de líneas celulares tumorales de distintos orígenes (linfoides, mama, pulmón, colón, próstata, cerebro, hígado, etc.) para el estudio preclínico de fármacos. Estas líneas celulares son comúnmente utilizadas  para los estudios de compuestos antitumorales y para el estudio de sus mecanismos de acción específicos (dianas farmacológicas).
  • Otros tipos celulares (Solicitar información).

Tejidos disponibles:

  • Arterias sistémicas de rata y humano en cultivo.
  • Arterias pulmonares de rata, ratón, embrión de pollo y humanas.
  • Ductus arteriosus humanos.

A continuación se enumeran los principales ensayos realizados para complementar los estudios in vivo y modelos animales:

– Test de compuestos inflamatorios

  • Determinación de prostaglandinas y leucotrienos por ELISA. Determinación de actividad COX-1 y COX-2.
  • Determinación de citoquinas proinflamatorias (ELISA, qRT-PCR y citometría de flujo (CBA)).
  • Estudios de activación en macrófagos (iNOs, COX-2, Citoquinas, PGs, etc.).

– Biología celular

  • Metabolismo de NO y determinación de ROS. Análisis de especies reactivas de oxígeno y peroxinitritos.
  • Proliferación y estudios de ciclo celular en células primarias (linfocitos).
  • Estudios de fagocitosis (neutrófilos, monocitos y células dendríticas).
  • Actividad de factores de transcripción y regulación génica (NF-κB, NF-AT, AP-1, SP1, STAT3…).
  • Estudio de ciclo celular (citometría de flujo).
  • Ensayos de co-localización y traslocación celular de proteínas.
  • Determinación actividad transcripcional de PPARs.
  • Ensayos de invasividad en Matrigel.
  • Imágenes tridimensionales y análisis morfométricos.
  • Captación de glucosa en respuesta a insulina.
  • Determinación de lipólisis.
  • Co-cultivos adipocitos/macrófagos.

– Señalización celular

  • Estudios de señalización, MAPKs (ERK 1/2, p38, JKN/SAPK); PKCs; Actividad Calcineurina; ensayos de activación de ciclinas, tirosina quinasas, ubiquitinación, sumolización, etc.
  • Determinación de marcadores de activación (citometría de flujo).
  • Ensayos de migración.
  • Actividad NK.
  • Estudios de señalización (calcio, pH, etc.).
  • Estudios de diferenciación de adipocitos en 3T3-L1.

– Apoptosis

  • Determinación de rutas apoptóticas. Potencial de mitocondria y liberación de mediadores proapoptóticos (citocromo-C, AIF).
  • Estudio de actividad de caspasas efectoras.
  • Determinación de citotoxicidad (MTT, XTT, LDH, Yoduro de propidio), apoptosis y necrosis.
  • Fragmentación de ADN (TUNEL).

– Parámetros vasculares

  • Registro de corrientes iónicas y potencial de membrana. Corrientes de K y Ca en células aisladas (miocitos vasculares de arterias pulmonares y sistémicas aislados en fresco y en cultivo).
  • Registro de calcio intracelular simultáneo con contractilidad vascular en anillos arteriales (fluorescencia de fura-2).
  • Registro de contractilidad vascular en arterias pulmonares y sistémicas de conductancia y resistencia.
  • Determinación de NO y especies reactivas de oxígeno. Dihidroetidina (superóxido) y diclorofluoresceína (peróxido), DAF-2 (NO) y otros…. en arterias, células o cortes histológicos. Medida de NO extracelular mediante electrodo amperométrico.

Otros parámetros (solicitar información)

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